Proteintech  PK10030  通用型總蛋白提取試劑盒

Proteintech  通用型總蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：PK10030

產(chǎn)品名稱：通用型總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格： 50T/100T

產(chǎn)品簡介：

Proteintech 通用型總蛋白提取試劑盒（PK10030）適用于提取各種動物優勢領先、植物的細(xì)胞或組織樣品中的總蛋白，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品中的總蛋白的提取共創美好，此款試劑盒提供的裂解液推動並實現，能夠高效地提取總蛋白，主要包括細(xì)胞質(zhì)覆蓋範圍、細(xì)胞膜優化程度、細(xì)胞核、核基質(zhì)奮勇向前、線粒體不斷豐富、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等蛋白組建，得到的總蛋白樣品可用于蛋白免疫印跡各有優勢、免疫沉淀、Co-IP重要的意義、ELISA檢測持續，蛋白質(zhì)分析和小規(guī)模蛋白層析純化等其他應(yīng)用。

 具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品說明：

關(guān)于試劑盒

●本試劑盒是一款廣譜再獲、通用型的總蛋白的提取試劑盒產品和服務，可用于大部分蛋白的提取激發創作；而對于一些低表達(dá)前景、易降解、磷酸化修飾增幅最大、疏水性蛋白等特殊蛋白質(zhì)的提取推薦選用其對應(yīng)的專用提取試劑盒（見下表）共享應用。

●用于Co-IP實(shí)驗的樣品不要對樣品進(jìn)行超聲波處理，也可將裂解液換成專用的Co-IP裂解液（PR20037）標準，提升提取效果示範推廣。

●裂解液在使用前需添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物。

●樣品制備完成后及時使用或分裝保存在-80℃重要作用。

●試劑盒開封后持續向好，裂解液可長期保存于4-8℃，SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（4X）推薦分裝-20℃保存充足，試劑盒過期后建議不要使用進展情況。

使用方法

1、細(xì)胞樣品

a至關重要、瓶內(nèi)裂解法（效果zui 佳）：適用于所有的貼壁細(xì)胞

  （1）吸凈培養(yǎng)基不久前，用冰的PBS清洗細(xì)胞表面2遍（動作輕柔，防止細(xì)胞脫落）提升行動，盡可能吸取殘留的PBS能力建設。

（2）在冰上按每1000萬細(xì)胞加入1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）于細(xì)胞瓶、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中研究進展，用移液管吹散貼壁的細(xì)胞無障礙，對于貼壁緊的細(xì)胞也可使用細(xì)胞刮收集，收集裂解液快速融入，在冰上放置30 min認為，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

b意料之外、離心法：適用于懸浮細(xì)胞和藥物處理過的細(xì)胞

（1）使用細(xì)胞刮收集細(xì)胞懸液（連同培養(yǎng)基一起收集）文化價值，4℃，500 g離心5 min置之不顧，收集沉淀不斷完善，沉淀用預(yù)冷的PBS洗滌兩遍，收集細(xì)胞沉淀方便，盡可能吸取殘留的PBS基礎上。

（2）按每1000萬細(xì)胞加入1 mL預(yù)冷的裂解液，在冰上放置30 min應用領域，期間每10 min上下顛倒混勻一次保持競爭優勢。

注：（1）細(xì)胞的收集優(yōu)先使用瓶內(nèi)裂解法處理，瓶內(nèi)裂解法可以有效的防止細(xì)胞在離心過程中破碎發展機遇，能有效地提高總蛋白得率長效機製，同時也能保留細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。

（2）對于藥物處理過的貼壁細(xì)胞則推薦使用離心法收集穩定，因為藥物處理過的細(xì)胞往往貼壁不牢改造層面，在PBS清洗階段容易丟失。

（3）不推薦使用yi酶消化優勢與挑戰，yi酶消化細(xì)胞不僅會造成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的wan全丟失經驗分享，同時會剪切一些對yi酶敏感的蛋白。

（4）一些細(xì)胞粘度高（HEK-293）和密度高的懸浮細(xì)胞（Jurkat趨勢、K562等）在加入細(xì)胞裂解液后容易形成絮狀物有力扭轉，此時應(yīng)及時的使用超聲破碎儀將其打散。

2一站式服務、組織樣本

a廣度和深度、采集與保存：

（1）采集組織樣本前先對動物去除血液（血液去除越干凈越好）深入交流，接著迅速解剖，采集所需要的組織樣本顯示。

（2）組織樣本如需保存雙向互動，可將采集的組織樣本液氮速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃保存設計能力。

（3）取樣順序：最先取胃腸道消化系統(tǒng)相關(guān)組織，接著取肺（巨噬細(xì)胞含量高）深入開展、肝臟（蛋白種類多）更為一致、膀胱、生殖系統(tǒng)相關(guān)的組織（睪丸技術的開發、卵巢研究與應用、子宮、輸卵管等）更高效，最后取心臟全面協議、脾臟、腎臟具體而言、骨骼肌工具、大小腦等組織。胃腸道消化系統(tǒng)相關(guān)組織推薦現(xiàn)取現(xiàn)制備喜愛，選用易降解蛋白提取試劑盒（PK10024)提取重要的角色。

b、清洗

（1）對于血液含量豐富的組織樣本如：心臟向好態勢、肝臟平臺建設、脾臟、肺註入了新的力量、腎臟等組織重要的作用，剪碎使用冰的PBS洗滌液清洗2-3遍（可以適當(dāng)按壓排出血液），直至樣本血紅色變淺去創新，濾紙吸干水分稱重足夠的實力。

（2）對于脂肪含量豐富的組織樣本，預(yù)先把樣本放在幾層紙巾上按壓又進了一步，去除部分脂類多種場景，然后再使用冰的PBS清洗1-2遍，濾紙吸干水分稱重規劃。

c擴大公共數據、破碎及裂解

（1）液氮研磨法：將剪碎的組織塊在研缽中加入液氮，快速研磨至細(xì)粉狀帶動擴大，轉(zhuǎn)移至EP管中核心技術體系，按每100 mg組織加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）開拓創新，使用移液器上下吹打混勻，直至wan全溶解必然趨勢。在冰上放置30 min促進善治，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

  （2）勻漿法：按每100 mg組織加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）多樣性，將樣品轉(zhuǎn)移到合適大小的預(yù)冷玻璃勻漿器中發揮效力，在冰浴條件下對樣品勻漿30-50次。在冰上放置30 min明顯，期間每10 min上下顛倒混勻一次安全鏈。

注：不同的樣品所需勻漿次數(shù)不同。鑒定方法：取20 ul勻漿30次后的組織樣品創新為先，加入等體積的0.4%臺盼藍(lán)溶液真正做到，混勻，在顯微鏡下觀察臺盼藍(lán)溶液染色陽性（藍(lán)色）細(xì)胞數(shù)目的比例創新延展，當(dāng)陽性（藍(lán)色）細(xì)胞wan全破碎強化意識，即可停止勻漿。若陽性（藍(lán)色）細(xì)胞破碎不wan全基本情況，則可適當(dāng)增加5-10次勻漿現場，隨后按照同樣的方法使用臺盼藍(lán)溶液進(jìn)行鑒定。

 （3）冷凍研磨機(jī)法：提前開啟冷凍研磨機(jī)預(yù)冷至關重要，將吸干水分的組織樣本剪成1-2 mm左右的小塊使命責任，按照每管100 mg分裝到2 mL離心管，同時每管加入1粒5 mm的研磨珠使用。將離心管和適配器放入液氮里浸泡速凍合規意識。將離心管和適配器轉(zhuǎn)移到冷凍研磨機(jī)，使用65 Hz研磨45s有效性，如果研磨效果不理想可中斷15s后重復(fù)研磨一次創新內容。每管加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），使用移液器上下吹打混勻廣泛關註，直至wan全溶解善於監督。在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次就能壓製。

注：（1）優(yōu)先推薦選用液氮研磨法和冷凍研磨機(jī)法更合理，其破碎效果zui 佳；如選用勻漿法更優美，需在冰水浴中對樣品進(jìn)行勻漿各方面。

（2）使用冷凍研磨機(jī)法對液氮速凍過的樣本進(jìn)行破碎，對離心管的材質(zhì)要求比較高，需選用專用的離心管適應性。

3堅實基礎、昆蟲樣本

     將昆蟲清洗干凈，使用液氮研磨法重要作用、勻漿法或冷凍研磨機(jī)法（參考組織樣本的破碎及裂解方法）將其破碎等地，按每50-100 mg樣本加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），在冰上放置30 min尤為突出，期間每10 min上下顛倒混勻一次規定。

4、植物樣本

   將植物清洗干凈空間載體，使用液氮研磨法或冷凍研磨機(jī)法（參考組織樣本的破碎及裂解方法）將其破碎（越碎越好）供給，按每100-200 mg樣本加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），在冰上放置30 min經驗分享，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

   注：植物樣本不推薦使用勻漿法趨勢，液氮研磨法或冷凍研磨機(jī)法中液氮對破碎植物的細(xì)胞壁有非常好的效果有力扭轉。

5、超聲處理

   將裂解的蛋白樣品放在冰上超聲破碎一站式服務，200W慢體驗，2 min（開2s，關(guān)2s）智能化，充分打斷核酸序列（用于Co-IP實(shí)驗的樣品不要對樣品進(jìn)行超聲波處理）科技實力。

6、樣品的使用與保存建設。

6.1  用于免疫沉淀在此基礎上、ELISA等非變性蛋白分析實(shí)驗，4℃前來體驗，10000 g離心5 min分離上清自主研發，取部分樣品用來測濃度，剩下的蛋白樣品可直接分成數(shù)管保存在-20℃或-80℃更加廣闊。

6.2  用于免疫印跡的變性蛋白分析實(shí)驗損耗，取部分樣品用來測濃度，剩下的蛋白樣品按照3:1比例非常完善，混合蛋白樣品和SDS-PAGE上樣緩沖液性能穩定。100℃沸水浴加熱5 min，以充分變性蛋白作用。冷卻至室溫后情況正常，4℃，10000 g離心5 min分離上清，可直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔或分成數(shù)管保存在-20℃或-80℃醒悟。

注：用于免疫印跡的變性蛋白分析數據顯示，在加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮樣后再離心，可提高總蛋白的得率也逐步提升。

Proteintech  通用型總蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

PK10030  通用型總蛋白提取試劑盒  50T/100T

PK10021  動物組織總蛋白提取試劑盒  30T