氨基酸(amino acid, AA)含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

動物肝臟深入交流、腎臟是氨基酸代謝的主要器官方案，故尿中氨基酸的變化最能反應肝建言直達、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反應灼傷供給、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時期氮代謝變化極致用戶體驗、植物對氮素的吸收兩個角度入手、運輸建強保護、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。

測定原理：

氨基酸的α -氨基可與水合茚三酮反應生產效率，產(chǎn)生藍紫色化合物使命責任，在 570 nm 有特征吸收峰；通過測定 570 nm

吸光度使用，來計算氨基酸含量合規意識。

組成：

試劑三臨用前加入 667μl 無水乙醇，蓋緊后充分混勻有效性，再加入 9.333ml 蒸餾水混勻創新內容，避光保存。試劑四臨用前加 1ml 蒸餾水廣泛關註，充分溶解我有所應。

標準品臨用前加 10ml 蒸餾水，充分溶解深入實施。1μmol/mL 標準液至關重要，4℃避光保存。

自備儀器和用品：

臺式離心機效果、水浴鍋有所應、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板合作關系、可調(diào)式移液槍著力提升、研缽、無水乙醇傳遞、冰和蒸餾水融合。

樣品中 AA 提取：

1相關性、按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織完成的事情，加入 1mL 試劑一）進行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到 1.5ml EP 管中穩定，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15 min改造層面；自來水冷卻后，8000g品質，利用好，4℃離心 10min，上清液置冰上待測解決問題。

2系列、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一）慢體驗，超聲波破碎細菌

或細胞（冰浴高質量，功率 20％或 200W，超聲 3s重要組成部分，間隔 10s流程，重復 30 次）；8000g勃勃生機，4℃離心 10min助力各業，取上清，置冰上待測提供有力支撐。

3應用、血清等液體：直接檢測。

測定步驟：

1.   分光光度計/酶標儀預熱 30 min品率，調(diào)節(jié)波長到 570 nm相貫通，蒸餾水調(diào)零。

2.   空白管：取EP 管積極影響，加入 10μl 蒸餾水自動化方案，100μl 試劑二，100μl 試劑三和 10μl 試劑四越來越重要，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）線上線下，置于沸水浴中保溫 15 min，冷卻后反復顛倒EP 管數(shù)次醒悟，于 570nm 測定吸光值數據顯示，記為A 空白管。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測完也逐步提升。

3.   標準管：取EP 管記得牢，加入 10μl 標準品，100μl 試劑二重要的作用，100μl 試劑三和 10μl 試劑四服務好，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫 15 min提高鍛煉，冷卻后反復顛倒EP 管數(shù)次發展邏輯，于 570nm 測定吸光值，記為A 標準管有所提升。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測完。

4.   測定管：取EP 管新的力量，加入 10μl 上清液先進水平，100μl 試劑二，100μl 試劑三和 10μl 試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）重要平臺，置于沸水浴中保溫 15 min深刻認識，冷卻后反復顛倒EP 管數(shù)次，于 570nm 測定吸光值應用提升，記為A 測定管主動性。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測完。

注意：空白管和標準管只需要測定一次發展的關鍵。

氨基酸含量計算公式：

a.  使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1） 按蛋白濃度計算

氨基酸含量（μmol /mg prot）= [C 標準品×V 標準品×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]÷（V 樣×Cpr）

=1×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白) ÷Cpr

（2） 按樣本質(zhì)量計算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)] ÷（V 樣總

÷V 樣）÷W

=1×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白) ÷W

（3） 按細胞數(shù)量計算

氨基酸含量（μmol /10⁴ cell）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)] ×

（V 樣總÷V 樣×細胞數(shù)量）

=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管) ÷細胞數(shù)量

（4） 按照液體體積計算

氨基酸含量（μmol /mL）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]÷V 樣

=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

C 標準品：標準品濃度道路，1 μmol/mL；V 標準品：反應體系中加入標準品體積真諦所在，0.01ml指導；W：樣品質(zhì)量， g充分；V 樣：反應體系中加入樣品提取液體積進一步完善，0.01ml；V 樣總：樣品提取液總體積競爭力，1mL調整推進；；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度機製性梗阻，mg/mL建強保護。

b.  使用 96 孔板測定的計算公式如下

（1） 按蛋白濃度計算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)] ÷（V 樣×Cpr）

=1×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白) ÷Cpr

（2） 按樣本質(zhì)量計算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白)]×（V 樣總÷V樣）÷W

=1×(A 測定－A 空白)÷(A 標準－A 空白) ÷W

（3） 按細胞數(shù)量計算

氨基酸含量（μmol /10⁴ cell）= [C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)] ×

（V 樣總÷V 樣×細胞數(shù)量）

=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管) ÷細胞數(shù)量

（4） 按照液體體積計算

氨基酸含量（μmol /mL）=[C 標準品×V 標準品×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]÷V 樣

=1×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

C 標準品：標準品濃度，1 μmol/mL生產效率；V 標準品：反應體系中加入標準品體積使命責任，0.01ml；W：樣品質(zhì)量使用， g情況較常見；V 樣：反應體系中加入樣品提取液體積，0.01mL主要抓手；V 樣總：樣品提取液總體積體製，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度創新科技，mg/mL服務延伸。

注意事項：

1.     試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制具有重要意義，且避光保存進一步，配制好未使用完的 4℃保存且 3

天內(nèi)使用完畢。

2.     為保證實驗結(jié)果的準確性強大的功能，需先取 1-2 個樣做預實驗實際需求，如果測定的吸光值過高（高于 2.5）解決方案，用蒸餾水稀釋后再測定。

3.     脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應在 570nm 處無吸收峰善謀新篇，因此增產，570nm 處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4. 最di檢出限為 100μmol/L方法。