氨基酸(amino acid, AA)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

肝臟重要方式、腎臟是氨基酸代謝的主要器官提供有力支撐，故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝、腎的生理狀態(tài)。另外進行培訓，氨基酸還能反應(yīng)灼傷、傷寒等方面情況創新科技。植物體內(nèi)氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期氮代謝變化新創新即將到來、植物對(duì)氮素的吸收、運(yùn)輸保護好、同化及營(yíng)養(yǎng)狀況等有重要意義組建。

測(cè)定原理：

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物特點，在 570 nm 有特征吸收峰深刻變革；通過(guò)測(cè)定 570 nm吸光度，來(lái)計(jì)算氨基酸含量和諧共生。

組成：

試劑三臨用前加入 2 ml 無(wú)水乙醇質生產力，蓋緊后充分混勻，再加入 28ml 蒸餾水混勻技術交流，避光保存先進的解決方案。試劑四臨用前加 5 ml 蒸餾水，充分溶解創造更多。

標(biāo)準(zhǔn)品臨用前加 10 ml 蒸餾水宣講活動，充分溶解。1μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)液工藝技術，4℃避光保存確定性。

自備儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)損耗、水浴鍋講故事、1ml 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍性能穩定、研缽全面革新、無(wú)水乙醇、冰和蒸餾水情況正常。

樣品中 AA 提刃袠I分類。?/span>

1、按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織提高鍛煉，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行室溫勻漿發展邏輯，然后轉(zhuǎn)移到 1.5 ml EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15 min製高點項目；自來(lái)水冷卻后為產業發展，8000g，4℃離心 10min有所增加，上清液置冰上待測(cè)各項要求。

2更高要求、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清新技術；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一）共同學習，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W深入，超聲 3s效高，間隔 10s，重復(fù) 30 次）基礎；8000g高效節能，4℃離心 10min，取上清大局，置冰上待測(cè)。

3邁出了重要的一步、血清等液體：直接檢測(cè)有序推進。

測(cè)定步驟：

1.   分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 570 nm需求，蒸餾水調(diào)零堅定不移。

2.   空白管：取EP 管，加入 50μl 蒸餾水更讓我明白了，500μl 試劑二迎難而上，500μl 試劑三和 50μl 試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）探索，置于沸水浴中保溫 15 min堅持先行，冷卻后反復(fù)顛倒EP 管數(shù)次，于 570nm 測(cè)定吸光值滿意度，記為A 空白管情況較常見。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測(cè)完。

3.   標(biāo)準(zhǔn)管：取EP 管主要抓手，加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)品體製，500μl 試劑二，500μl 試劑三和 50μl 試劑四很重要，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）能力和水平，置于沸水浴中保溫 15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP 管數(shù)次異常狀況，于 570nm 測(cè)定吸光值研究，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測(cè)完應用創新。

4.   測(cè)定管：取EP 管深化涉外，加入 50μl 上清液體系，500μl 試劑二，500μl 試劑三和 50μl 試劑四開展試點，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失）攜手共進，置于沸水浴中保溫 15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP 管數(shù)次推進一步，于 570nm 測(cè)定吸光值經過，記為A 測(cè)定管。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測(cè)完力度。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次明確了方向。

氨基酸含量計(jì)算公式：

（1） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×（V樣總÷V 樣）÷W

=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷W

（2） 按照樣本蛋白濃度計(jì)算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]÷

（V 樣×Cpr）

=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷Cpr

（3） 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

氨基酸含量（μmol /10⁴ cell）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)] ×

（V 樣總÷V 樣×細(xì)胞數(shù)量）

=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

（4） 按照液體體積計(jì)算

氨基酸含量（μmol /ml）=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]÷V 樣

=1×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1μmol/ml勇探新路；V 標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積單產提升，0.05 ml；W：樣品質(zhì)量試驗， g勞動精神；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積，0.05 ml製度保障；V 樣總：樣品提取液總體積預下達，1ml，Cpr：樣本蛋白 濃度統籌推進，mg/ml方案。

注意事項(xiàng)：

1.試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配置了解情況，且避光保存深入，配置好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性重要的，需先取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)首次，如果測(cè)定的吸光值過(guò)高（高于 2.5），用蒸餾水稀釋后再測(cè)定部署安排。

3. 脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)在 570nm 處無(wú)吸收峰搖籃，因此，570nm 處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量推廣開來。

4.最  di 檢出限為 100μmol/L推動。