雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定優化程度，確保蛋白濃度在 1～10mg/ml 范圍內(nèi)。
測(cè)定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算奮勇向前。此外不斷豐富，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測(cè)定原理：
強(qiáng)堿性溶液中組建，雙縮脲與 CuSO4 形成紫色絡(luò)合物各有優勢；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)重要的意義，故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量持續。該方法測(cè)定范圍為 1~10mg 蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品再獲，尤其是動(dòng)物材料產品和服務。
組成：
產(chǎn)品名稱 | DE6002-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 20ml | 4℃ |
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 | 1ml | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1ml×1 瓶，5 mg/ml體驗區，4℃保存增多。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀有望、微量石英比色皿/96 孔板進一步推進、移液器和蒸餾水。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取提葮藴?。?/span>
1示範推廣、液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。
2重要作用、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織持續向好，加入 1ml提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））
冰浴勻漿充足，8000g進展情況，4℃離心 10min，取上清綠色化發展，即待測(cè)液至關重要。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）
3 、細(xì)菌用上了、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液）提升行動，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒關註，間隔 7 秒研究進展，總時(shí)間 3min）無障礙；然后 8000g，
4℃快速融入，離心 10min認為，取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min增強，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 540 nm重要意義，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取 0.5mL EP 管更加廣闊，加入 40μl 蒸餾水規劃，200μl 試劑一，混勻后室溫靜置 15 min方便，取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板基礎上，540nm 比色，記為A 空白管應用領域。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 0.5mL EP 管，加入 40μl 標(biāo)準(zhǔn)液進行培訓，200μl 試劑一發展機遇，混勻后室溫靜置 15 min，取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板法治力量，540 nm 比色全技術方案，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：取 0.5mL EP 管供給，加入 40μl 待測(cè)液優勢與挑戰，200μl 試劑一，混勻后室溫靜置 15 min解決方案，取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板趨勢，540nm 比色，記為A 測(cè)定管上高質量。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次一站式服務。
樣品中蛋白質(zhì)濃度計(jì)算公式:
C 待測(cè)（mg/ml）= C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
=5×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
注意事項(xiàng):
1. 樣品蛋白濃度須在 1～10mg/ml 范圍內(nèi)，低于 1mg/ml 不能用此法深入交流，高于 10mg/ml 須做相應(yīng)稀釋引領作用。因此測(cè)定前用 1～2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在 1～10mg/ml 范圍內(nèi)臺上與臺下。
2. 待測(cè)樣品蛋白提取可用生理鹽水用的舒心、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨集聚效應、Tris 緩沖液干擾集成，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
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更新時(shí)間：2025-01-13 
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