鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶(nithine-δ-aminotransferase ,δ-OAT)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
脯氨酸是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)建設。高等植物中脯氨酸代謝因其初始底物不同重要作用，分為谷氨酸( Glu) 和鳥氨酸( Orn) 兩條合成途徑生產能力。鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶( δ-OAT) 是 是以鳥氨酸為前體合成脯氨酸途徑的關(guān)鍵酶達到，對植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。
測定原理：
鳥氨酸和α-酮戊二酸在鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶和 NADH 作用下發(fā)生氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)生成吡咯啉-5-羧酸（P5C）適應性強，同時產(chǎn)生NAD增產，通過檢測 340nm 處的吸光度的變化可反映出鳥氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性的高低。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BH6016-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 110ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 30ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 2 瓶 | -20℃ |
說明書 | 1 份 |
試劑二臨用前加 8ml 試劑一充分溶解奮戰不懈；用不完的試劑 4℃保存市場開拓。試劑三臨用前加 8ml 試劑一充分溶解；用不完的試劑 4℃保存大大縮短。試劑四臨用前每瓶加 4ml 試劑一充分溶解要落實好；現(xiàn)配現(xiàn)用。
自備儀器和用品：
天平更默契了、低溫離心機先進技術、研缽、酶標(biāo)儀不合理波動、96 孔板宣講手段。
酶液提戎匾ぞ?。?/span>
1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g配套設備，加入 1ml 提取液）加入提取液更優質，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min推進高水平，取上清置冰上待測脫穎而出。
2、細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入1ml 提取液）生產創效，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w廣泛應用，超聲 3 秒，間隔 7 秒橫向協同，總時間 3min）哪些領域；然后 4℃，10000g離心 10min不斷創新，取上清置冰上待測建立和完善。 3、液體：直接檢測參與水平。
測定操作：
1大型、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 340nm明確相關要求。
2重要意義、將配好的試劑二、三深化涉外、四 37℃預(yù)熱 5min追求卓越。（注意：粉劑試劑需要自行配制）
3、取 96 孔板參與能力，依次加入 60μl 試劑二合理需求，60μl 試劑三，60μl 試劑四充分發揮，20μl 粗酶液高質量，充分混勻，記錄 340nm
處初始吸光值和 37℃反應(yīng) 10min 的吸光值A2選擇適用，△A=A1-A2管理。
計算公式：
用 96 孔板測定的計算公式如下
（1） 按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。 δ-OAT（nmol/min /mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T
=321.54×ΔA÷Cpr
（2） 按照樣本質(zhì)量計算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位業務指導。 δ-OAT（nmol/min /g 鮮重）=ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷W
（3） 按照細胞數(shù)量計算
酶活單位定義：每 104 個細胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位改進措施。 δ-OAT（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷細胞數(shù)量
（4） 按照液體體積計算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個酶活力單位。 δ-OAT（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T
=321.54×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積還不大，0.2ml高產；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)信息化技術，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光徑良好， 0.5cm逐步顯現；V 樣：加入樣本體積，0.02ml引領；V 樣總：加入提取液體積自動化裝置，1ml；T：反應(yīng)時間應用前景，10 min有很大提升空間；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml首次；W：樣本質(zhì)量可能性更大，g
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更新時間：2025-01-08 
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