Chromatrap ChIP相關(guān)試劑盒

Chromatrap公司技術(shù)領(lǐng)域組建。

Chromatrap為Porvair Science公司旗下的產(chǎn)品堅持先行。該品牌產(chǎn)品主要為ChIP相關(guān)試劑盒主動性。Chromatrap® ChIP 測(cè)定技術(shù)比傳統(tǒng)磁珠法的效率更高，原因是與蛋白質(zhì) A 或 G結(jié)合的固相多孔聚合物捕獲染色質(zhì)的效率更高銘記囑托。盡管同樣是使用離心柱法重要的，但其優(yōu)勢(shì)是瓊脂糖珠或磁珠遠(yuǎn)不可相比的

介紹

在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中有所增加，新生RNA可以與DNA模板鏈雜交，使非模板DNA鏈成為單鏈明確了方向。這些結(jié)構(gòu)被稱為 R 環(huán)系統性，它們的持續(xù)形成會(huì)對(duì)基因組完整性造成有害影響，這可能是由于未配對(duì)的單鏈 DNA （ssDNA）

盡管R環(huán)有可能在基因組的很大一部分上形成改進措施，但它們并不是轉(zhuǎn)錄的簡(jiǎn)單結(jié)果就此掀開。由于 DNA 序列長足發展、轉(zhuǎn)錄、拓?fù)浜腿旧|(zhì)環(huán)境的復(fù)雜相互作用穩步前行，它們發(fā)生在特定的保守位點(diǎn)上 （切丹結構不合理， 2016）。在具有未甲基化 CpG 島啟動(dòng)子的活性哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)編碼基因上逐步顯現，R 環(huán)富集在啟動(dòng)子和終止位點(diǎn)上并增強(qiáng)激活銘記囑托，并且它們與活性轉(zhuǎn)錄的組蛋白標(biāo)記相關(guān)，例如組蛋白 H3 賴氨酸 4 的單甲基化和三甲基化 （H3K4me1/3） 和 H3 乙踝詣踊b置；?span>.R-loops可以作為轉(zhuǎn)錄激活因子示範，但它們也可以通過(guò)各種機(jī)制誘導(dǎo)不同細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)錄抑制.R環(huán)在激活或抑制中的這種“雙重"功能強(qiáng)烈表明，R環(huán)的形成在不同的情況下可以具有不同的作用和機(jī)制有很大提升空間。

Polycomb 組（PcG） 蛋白是轉(zhuǎn)錄抑制的主要表觀遺傳調(diào)節(jié)因子運行好，它們需要沉默胚胎干細(xì)胞 （ESC） 中富含 CpG 的發(fā)育調(diào)節(jié)基因，并維持在細(xì)胞承諾期間建立的基因表達(dá)模式 它們組裝在兩個(gè)主要的多亞基復(fù)合物中：Polycomb 抑制復(fù)合物 1 （PRC1） 和 PRC2可能性更大。PRC1 和 PRC2 的催化組分分別為 RING1B 和 EZH2部署安排。RING1B 單泛素化賴氨酸 119 （H2Aub1） 中的組蛋白 H2A，EZH2 是一種甲基轉(zhuǎn)移酶技術，負(fù)責(zé)賴氨酸 27 （H3K27me2/3） 中 H3 的二甲基化和三甲基化推廣開來。

Polycomb介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄抑制機(jī)制尚不wan全清楚。盡管它們?cè)谝种浦衅鹱饔孟鄬^高，但小鼠胚胎干?xì)胞 （mESC） 中的 PcG 靶基因顯示活性染色質(zhì)標(biāo)記 H3K4me3資源配置、RNA 聚合酶 II （Pol II） 和一般轉(zhuǎn)錄因子。Pol II 在 PcG 抑制基因的啟動(dòng)子和編碼區(qū)上檢測(cè)到相關，并表現(xiàn)出其 C 末端結(jié)構(gòu)域 （CTD） 的絲氨酸 5 磷酸化 （Ser5P）大力發展，但不表現(xiàn)出 Ser2P 或 Ser7P，后者是生產(chǎn)性轉(zhuǎn)錄延伸的標(biāo)志物.與沉穩(wěn)的Pol II的存在一致生產效率，在一些PcG靶標(biāo)

例如產能提升，轉(zhuǎn)錄本身起著一定的作用，因?yàn)閮H基因沉默就可以促進(jìn)PRC2募集到CpG島啟動(dòng)子.建議通過(guò)PRC2（Wang 等人節點，2004,Boyer 等人通過活化，2006 年）。然而成就，非經(jīng)典 PRC1（含有 RYBP 而不是 CBX）也可以通過(guò) KDM2B 賴氨酸去甲基化酶

迄今為止同時，已經(jīng)在人類 ESC 中探索了 PcG 靶基因上 R 環(huán)的存在，其中基于生物信息學(xué)分析檢測(cè)到正相關(guān) （Ginno 等人2013 年）效高性，在分化的小鼠成纖維細(xì)胞（NIH 3T3 系）中模式，報(bào)告了負(fù)相關(guān) （Sanz 等人，2016 年).因此，目前尚不清楚PcG抑制機(jī)制是否以及如何受到R環(huán)的調(diào)節(jié)高品質。

在這里不折不扣，我們使用 mESC 來(lái)探索 R 環(huán)對(duì) PcG 抑制機(jī)制的貢獻(xiàn)。我們發(fā)現(xiàn) R 環(huán)在 PcG 靶標(biāo)處形成資源優勢，R 環(huán)丟失導(dǎo)致 PcG 募集不足和 Pol II 的鎮(zhèn)定狀態(tài)改變高效利用，導(dǎo)致基因去抑制。全基因組分析表明估算，R環(huán)的形成不是低轉(zhuǎn)錄水平的微不足道的結(jié)果講理論，并且僅發(fā)生在PcG抑制基因的一個(gè)子集上。單獨(dú)敲除組成型 EZH2 （PRC2） 不足以影響 R 環(huán)或 RING1B （PRC1） 募集不要畏懼，也不會(huì)導(dǎo)致 R 環(huán)陽(yáng)性基因的轉(zhuǎn)錄去抑制服務為一體。相反，在這些情況下去除 R 環(huán)會(huì)導(dǎo)致基因激活并減少 RING1B 募集逐漸顯現。在抑制 EZH2 催化活性后全會精神，R 環(huán)和 RING1B 可以抑制 PcG 靶標(biāo)。我們的研究結(jié)果揭示了 R 環(huán)和 PRC1 募集之間意想不到的相互作用拓展基地，這有助于 PcG 抑制集中展示。

結(jié)果

R-環(huán)在 PcG 抑制基因上形成為了研究 R 環(huán)是否在 PcG 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄沉默中發(fā)揮作用，我們使用 DNA-RNA 免疫沉淀（DIP 或 DRIP）分析 （Skourti-Stathaki 等人體系流動性，2011 年,Ginno 等人探索創新，2012 年,Ginno 等人，2013 年,Skourti-Stathaki 等人實現了超越，2014 年,Sanz 等人配套設備，2016 年） 在 mESC 中。我們選擇了五個(gè)先前表征的基因相對開放，即 Msx1、Math1脫穎而出、Nkx2.2拓展應用、Nkx2.9 和 Gata4。這些基因具有注釋良好的 CpG 島啟動(dòng)子註入新的動力，在其啟動(dòng)子和編碼區(qū)富含 GC領先水平，并且在 mESC 中由 PRC1、PRC2 和穩(wěn)固的 Ser5P Pol II （Stock 等人雙重提升，2007 年,Brookes 等人戰略布局，2012 年,Ferrai 等人，2017 年).用 RNA-DNA 雜交特異性抗體 S9.6 （Boguslawski 等人表現明顯更佳，1986 年）狀態，并使用位于含有轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn) （TSS） 的啟動(dòng)子 （P） 區(qū)域和基因體編碼 （C） 區(qū)域內(nèi)的引物分析純化的 DNA。作為陽(yáng)性對(duì)照，我們使用了高表達(dá)的活性基因 β-肌動(dòng)蛋白廣泛認同，它在 P 和 C 區(qū)域形成 R 環(huán) （Skourti-Stathaki 等人國際要求，2011年,Skourti-Stathaki 等人，2014 年).作為陰性對(duì)照鍛造，我們使用不形成 R 環(huán)的活性基因 CyclinB1（Skourti-Stathaki 等人競爭激烈，2014 年）和在mESC中既不表達(dá)也不與PcG或Pol II相關(guān)的基因Myf5（Stock 等人，2007 年,Brookes 等人改善，2012 年).正如預(yù)期的那樣空白區，R-環(huán)在β-肌動(dòng)蛋白上富集，但在CyclinB1或Myf5上未檢測(cè)到信息化。值得注意的是形勢，在所有五個(gè) PcG 抑制基因的 P 和 C 區(qū)域，R 環(huán)都特異性富集充分發揮。

以下為Chromatrap公司熱銷產(chǎn)品